La bacteria inoculada se enfrenta sobre la superficie del medio de agar a una solución antibiótica absorbida en discos de papel de filtro o en pastillas.
El medio de cultivo más frecuentemente empleado es el de Müeller-Hinton. Su pH debe estar entre 7,2-7,4 y grosor entre 4-6 mm. El inóculo bacteriano debe tener una turbidez similar al 0,5 de la escala de McFarland y la inoculación se debe efectuar con hisopo de algodón estéril. La lectura se realiza entre 18-24 h, adecuado únicamente para bacterias patógenas de rápido crecimiento.
